Code produit : BMC-02

Les bases de la cytométrie en flux et du tri cellulaire

  • Vous connaîtrez les principes régissant le cytométrie en flux.
  • Vous appréhenderez le tri cellulaire ainsi que les bonnes pratiques de laboratoire en cytométrie.
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Objectifs pédagogiques

Comprendre les principes de la technologie : la fluorescence, les fluorochromes, le cytométre.
Maîtriser les bonnes pratiques de laboratoire en cytométrie.
Appréhender le tri cellulaire.
Présenter différentes applications de la cytométrie en flux.

Programme

Jour 1 :

Fluorescence et fluorochromes

  • Rappel sur la fluorescence
  • Les différents fluorochromes
  • Caractéristiques spectrales
  • Propriétés – Comment choisir les fluorochromes ?

Principe de la cytométrie en flux

  • Système fluidique et optique
  • Collection et traitement des signaux

Représentation des données

  • Réglages

Application à l’analyse de la prolifération cellulaire

  • Analyse monoparamétrique
  • Elimination des doublets
  • Détermination des effectifs dans les différentes phases du cycle cellulaire

Analyse biparamétrique

  • Analyse de la synthèse d’ADN par incorporation de bromodésoxyuridine
  • Détection des cellules en mitose
  • Exemples d’applications
  • Quelle méthode choisir ?

Travaux d’application interactifs

 

Jour 2 :

Tri par cytométrie en flux

  • Principe du tri par déflection de gouttes
  • Les différents types de trieurs
  • Performance et limites du tri par déflexion
  • Tri cellulaire et bio-sécurité
  • Préparation de l’échantillon
  • Alternative ou pré-enrichissement par tri magnétique
  • Clonage
  • Exemple de tris

Bonnes pratiques cytométriques

  • Préparation du cytomètre et contrôle qualité
  • Préparation de l’échantillon
  • Réglages des détecteurs
  • Réglages des compensations
  • Réalisation des témoins
  • Détermination du nombre de cellules à analyser
  • Règle d’un panel design multi-couleurs

Différentes applications en cytométrie en flux

  • Phénotypage et cytokines intracellulaires
  • Viabilité et mort cellulaire
  • Détection de l’apoptose
  • Flux calcique
  • Dosages multiplex de protéines type luminex

Travaux d’application interactifs 

Revue des nouveaux outils en cytometrie de flux

  • Cytométrie à focalisation acoustique
  • Cytométrie spectrale
  • Cytométrie de masse
  • L’analyse non supervisée (SPADE …)
Formateurs

Dr X. Ronot : Docteur en Toxicologie Fondamentale et Appliquée. Diplomé universitaire de Cytométrie en Flux.
Mme M. Andrieu

Informations complémentaires

Prérequis : AUCUN. Chaque formation donne lieu à l’envoi d’une attestation de fin de formation. En cas d’évaluation des acquis, les résultats sont communiqués.

Public concerné

Personnels scientifiques et techniques voulant s’initier à la cytométrie en flux et au tri cellulaire.

Pédagogie

Remise de support de cours. La formation sera sanctionnée par une attestation de formation.

 

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Tél : 01 41 10 26 22

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